این روش برای شناسایی رشته های کلاژن در بافتهایی مانند پوست، قلب و غیره بهکار میرود و بر اساس تثبیت بافت در فرمالین و برش قالب پارافینی یا برشهای انجمادی نیز کارایی دارد. در این رنگآمیزی رشتههای کلاژن آبی و هسته سیاه در یک زمینه قرمز مشاهده میشود. نمونههای مورد استفاده در این رنگآمیزی بهتر است با محلول ثبوتی فرمالین 10 درصد تثبیت شده باشند اما با محلولهای ثبوتی معمول دیگر نیز قابل انجام است. برشهای پارافینی با ضخامت 5 میکرون برای این رنگآمیزی مناسب است
روش رنگآمیزی
- برشها تا آب آورده شود.
- رنگآمیزی با محلول هماتوکسیلین آهن وایگرت 30-20 دقیقه
- شستوشو در آب جاری
- در محلول 1 درصد اسید الکل دیفرانسیه (تمایز رنگ) شود.
- شستوشو در آب تا بافت آبی شود.
- محلول پونسو فوشین 5-1 دقیقه
در برخی منابع به جای پونسو فوشین از محلول اسکارلت فوشین بای بریچ استفاده میشود که فرمول تهیه آن به شرح زیر است:
محلول آبی 1 درصد اسکارلت 90 میلیلیتر
محلول آبی 1 درصد اسید فوشین 10 میلیلیتر
اسید استیک گلاسیال 1 میلیلیتر
- شستوشو در آب اسید
- محلول فسفوتنگستیک فسفو مولیبدیک تا رشتههای کلاژن صورتی کمرنگ شوند (10 دقیقه)
- شستوشو در آب اسید
- محلول لایت گرین یا محلول آنیلین بلو 5-2 دقیقه
اگر از محلول لایت گرین استفاده شود کلاژن، موسین و غضروف سبز و اگر از آنیلین بلو استفاده شود به رنگ آبی درمیآید.
- شستوشو در آب اسید
- آبگیری، شفافسازی و چسباندن لامل
نتیجه رنگآمیزی
هسته آبیتیره
سیتوپلاسم قرمز روشن
عضله قرمز تیره
فیبرین و هیالین قرمز شفاف
غضروف، کلاژن و موسین آبی تا سبز