رنگ آميزي هماتوکسيلين – ائوزين ,

    گزيلل

   الکل اتيليک با غلظت­هاي 70 درصد تا مطلق

  اسيد الکل

   محلول اشباع کربنات ليتيوم

   رنگ هماتوکسيلين

   رنگ ائوزي

روش تهیه اسید الکل

•    اسيد کلريدريک نرمال                1 ميلي­ليتر

•    الکل اتيليک 70درصد                99 ميلي­ليتر

روش تهیه محلول اشباع کربنات لیتیم

•    کربنات ليتيوم                        1 گرم

•    آب مقطر                              100 ميلي­ليتر

روش تهیه محلول ائوزین

•    آب مقطر                               100 ميلي­ليتر

•    ائوزين                                1 گرم

•    تيمول                              يک قطعه کوچک

روش تهیه رنگ هماتوکسیلین

•      هماتوکسيلين                          1 گرم

•      الکل اتيليک مطلق                    20-10 ميلي­ليتر

•      آلوم آلومينيوم                         20 گرم

•      آب مقطر                              200 ميلي­ليتر

•      اسيد مرکوريک                        5/0 گرم

هماتوکسيلين در الکل و آلوم آلومينيوم در آب مقطر در مجاورت کمي حرارت حل گرديده، دو محلول فوق با هم مخلوط شده و به سرعت جوش آورده شدند. در همان موقع اسيد مرکوريک به آن اضافه شده و با قرار دادن در آب سريعاً خنک گرديد.

مراحل مختلف رنگ امیزی

پارافين­زدايي

پارافين موجود در اطراف بافت­ها مانع از نفوذ رنگ به داخل برش­هاي بافتي مي­شود. بنابراين براي زدودن پارافين، لام­ها در سه ظرف گزيلل فرو برده شدند که در هر ظرف به­مدت چهار دقيقه باقي ماندند.

آبدهي

در اين مرحله با استفاده از الکل اتيليک با درجات نزولي الکل مطلق،90، 80 و70 عمل آبدهي صورت گرفت. لام­ها در هر ظرف به مدت سه دقيقه قرار داده شدند.

رنگ­آميزي در هماتوکسيلين

لام­ها به مدت 15 دقيقه در رنگ هماتوکسيلين قرار گرفتند. پس از خارج کردن لام­ها از ظرف حاوي هماتوکسيلين، در آب جاري به مدت 5-3 دقيقه شستشو داده شدند.

زدودن رنگ اضافي

به منظور زدودن رنگ اضافي و تمايز، لام­ها در اسيد الکل به مدت 3 ثانيه فرو برده شدند. سپس نمونه­ها مجدداً در آب جاري به مدت 5-3 دقيقه شستشو داده شدند.

قراردادن در کربنات ليتيوم

براي ثابت کردن رنگ هسته، لام­ها به مدت 3 دقيقه در ظرف حاوي کربنات ليتيوم قرار گرفتند. سپس نمونه‌ها در آب جاري شسته شدند.

رنگ­آميزي در ائوزين

نمونه­ها در ظرف حاوي ائوزين به مدت 10- 5 دقيقه قرار داده شده و سپس به مدت 3-2 دقيقه در آب جاري شستشو داده شدند.

آبگيري

دراين مرحله به منظور آبگيري سبد حاوي لام­ها در ظرف محتوي الکل اتيليک با درجات صعودي (70، 80، 90 درصد و الکل مطلق) و در هر کدام به مدت 3 دقيقه قرار گرفتند.

شفاف نمودن به وسيله‌ی گزيلل

بعد از خشک کردن، لام­ها در سه ظرف گزيلل و در هر کدام به مدت 3 دقيقه قرار داده شدند.

چسب زدن لام­ها

در مرحله‌ی آخر لام­هاي رنگ­آميزي شده، از سبد خارج شده و پس از تميز کردن اطراف نمونه، يک قطره چسب آنتلان روي لام قرار داده و يک لامل را با زاويه 45 درجه به آرامي روي لام گذاشته تا هواي بين لام و لامل خارج گردد. سپس با يک پنس روي لامل اندکي فشار داده تا هواي بين لام و لامل کاملاً خارج شود. پس از خشک شدن لام، نمونه­ها آماده مطالعه گرديدند.

نتیجه رنگ­آمیزی: هسته سلول ها به رنگ آبی تیره تا سیاه و سیتوپلاسم به رنگ صورتی در می­آید.